时间段:
9:11-13:02,13:16-17:37
坐标位置:
中国泰安,山东农业大学本部国重楼417室
任务一:普通PCR
实际操作步骤:
1、体系
模板DNA:1微升
前引物(F)、后引物(R)各0.3微升
酶Mix:10微升
dH⒉O补足(即+8.4微升)
先依据每对引物的点样数配置混合体系足够量,再取19微升点样,然后+1微升模板。
2、跑PCR
提前预约PCR仪。
12×8的96孔板盖皮套盖,旋转。
变性94℃
退火是引物与模板结合的过程,退火温度依据所使用引物的平均Km值定,用Km-5℃,用小的那个,温度设定尽量不要低于55℃。
延伸72℃,此时Taq酶的活性最高;延伸温度时间设定有要求,拟南芥20s,水稻60s;温度编辑栏设置具体参数。
任务二:电泳
1、配制1%的琼脂糖凝胶电泳液
60mL液(可适当多加点)+0.6g琼脂
25×2孔
2、具体注意问题
带手套。
微波炉溶解至无小的晶体。
溶好后移液枪+EB,出现红色即可。
正确接好正负极,DNA在碱性缓冲液中带负电荷,外加电场向正极移动。
记得在一侧空一个格加Marker。
任务三:紫外显影
依据条带位置判断是否跑出了所需要的片断,分析结果。