中国医科大学最近发表了一篇7分的文章，
我们一起来学习一下吧~
《LINC00665可以被TAF15S延长半衰期，并通过STAU1介导的mRNA降解阻止了胶质瘤细胞的癌变》
为了寻找神经胶质瘤中lncRNA及其有关的治疗靶标，作者从临床样本和癌细胞株的RNA表达谱中筛选到了一批神经胶质瘤的差异表达基因，通过数据库筛选和软件预测了这些基因之间的结合位点。RNA-IP、ChIP和双荧光素酶机制实验验证了互作关系，RNA和蛋白的表达也做了基因之间的调控关系。最后，通过动物实验验证了lncRNA相关的3个基因组合抑癌效果最优，具有成为治疗靶标的价值。
01
文章亮点
通过引入了一个转录后调控的关键蛋白——STAU1，把lncRNA调控下游转录因子的关系串联在一起；lncR665可以被上游的TAF15调控，同时lncR665调控转录因子MTF1和YY2的降解。
02
涉及的调控机制
✦ TAF15可以延长lncR665的半衰期；
✦ lncR665可以与促癌基因YY2和MTF1转录因子结合配对；
✦ lncR665在双链RNA结合蛋白STAU1的帮助下，lncR665可以使YY2和MTF1的mRNA降解；
✦ YY2和MTF1是细胞周期蛋白GSTE1的转录因子，YY2和MTF1启动GSTE1的表达；
调控机制图
03
实验思路
➀发现抑癌基因TAF15(转录因子)
图1A-C正常组织/正常细胞相比，肿瘤的TAF15表达水平更低，肿瘤分级越高，TAF15越低。
补充图1a：TAF15低表达患者组生存期更短。
➁ 发现抑癌基因lncR665
补充图2：lncRNA表达谱分析：癌细胞比正常细胞的lncR665表达水平更低，TAF15高表达细胞株的lncR665表达水平也更低。
图1 D：FISH定位，看正常细胞比肿瘤细胞的lncR665（红色）更多；
图1 E：QPCR水平，看正常细胞比肿瘤细胞 lncR665表达更多；
图1 F：cck8检测，肿瘤细胞过表达TAF15增殖下降，肿瘤细胞过表达lncR665增殖下降， 肿瘤细胞同时过表达TAF15和 lncR665，增殖进一步下降。
图1 G：凋亡检测，图1 H：细胞侵袭
肿瘤细胞过表达TAF15凋亡增加，侵袭减少，
肿瘤细胞过表达lncR665凋亡增加，侵袭减少，
肿瘤细胞同时过表达TAF15和 lncR665，凋亡进一步增加，侵袭减少。
➂ TAF15与lncR665存在相互作用
图2 A：QPCR检测，肿瘤细胞过表达TAF15，lncR665增加；
图2 B：RNA IP+QPCR检测，肿瘤细胞 TAF15可以与lncR665共沉淀；
图2 C：RNA pulldown+WB检测，肿瘤细胞 lncR665可以pull down TAF15；
图2 D：新生RNA捕获 + QPCR检测，肿瘤细胞过表达TAF15，新生lncR665不变；
图2 E：RNA聚合酶抑制剂+QPCR检测，肿瘤细胞过表达TAF15， lncR665 半衰期延长；
➃ 发现MTF1和YY2是促癌基因
➄ STAU1和lncR665、MTF1(转录因子)和YY2(转录因子)存在调控关系
图3A-B：在QPCR和WB水平，lnR665过表达时，MTF1减少；STAU1过表达时，MTF1增加；lnR665和STAU1同时过表达时，MTF1恢复。
图3C：RNA IP+QPCR检测，STAU1可以拉取lncR665或MTF1。
图3D：双荧光素酶检测，lncR665结合MTF1的3’UTR 。
图3EQPCR检测lncR665使MFT1半衰期缩短，STAU1使MFT1半衰期缩短延长；
图3G-Icck8、凋亡、侵袭实验，肿瘤细胞过表达MTF1，可以挽救LncR665的抑癌作用。
➅ 预测并验证MTF1和YY2可以启动细胞周期蛋白GTSE1的转录
图7A：生信预测+ChIP+PCR验证MTF1结合GTSE1的启动子区；
图7B-C：敲除或过表达MTF1细胞株，QPCR和WB验证，MTF1和GTSE1有正相关趋势；
➆ 生信分析临床数据验证发现MTF1、YY2和GTSE1高表达都与预后不良相关
➇ 体内验证TAF15+lncR665+MTF1-或YY2- 3个组合的抑癌效果最优
图8 A-C :TAF15+或lnc665+都是抑癌；MTF1-或YY2-都是抑癌；TAF15+lncR665+MTF1-或YY2-抑癌效果最优。
⑨ 体内验证GTSE1-也有明显抑癌效果
注：为了方便理解，以上按照作者的推测标出了抑癌基因和促癌基因）
04
点评
以lncR665为中心，研究者讲明了临床预后有关的分子TAF15-lncR665-MTF1/YY2-GTSE1通路。美中不足的是，研究者没有lncR665差异表达的临床预后分析结果，而且在其他肿瘤类型中，lncR665是促癌基因，和本研究结论相反。
最后两张表格总结这篇文章的实验思路和实验方法
