方法的优缺点:
(1)Western blot
优点:体系简单,不需要复杂仪器设备,比较适合在有一定优化的情况下,低通量的获取活性分析结果。
缺点:检测结果易受抗体与抗原结合特异性和灵敏度影响
(2)质谱
优点:测定的灵敏度较高。
缺点:质谱分析流程复杂,设备成本高;质谱一般选用人工合成 甲基化肽段,肽段大小要谨慎选择。有些去甲基化酶的底物亲和性会因为底物的大小而发生变化,有可能会因此产生错误的结果。
(3)酶学方法:反应灵敏,可以用于高通量筛选;
酶学方法:LSD1的产物为甲醛,利用甲醛脱氢酶检测甲醛的存在。
用3H标记SAM作为甲基供体合成3H标记的甲基化组蛋白,以这种组蛋白为底物,与待测去甲基化酶反应,如果具有酶活性,则能去甲基化,产生3H标记的甲醛,甲醛与NAD+在甲醛脱氢酶的催化下能形成甲酸和NADH,NADH含量可以通过340nm处的OD来测定,以此来表征甲醛水平。