啮齿动物固定的目的是为了快速且均匀地将组织保持于特定的生存状态。虽然将组织直接放置在固定液中可以很好地用于小块组织的固定。但是像完整大脑，心脏这样的较大样本会引起浸入式固定的问题，因为固定液并不会以相同的速率到达组织的所有区域，而组织往往在固定液进入前即发生缺氧反应。利用循环系统直接灌注固定液的优点是化学物质可以使用天然的血管网络系统快速到达生物体的各个角落以达到整体固定的效果。一种低成本，快速，可控和统一的固定方法，使用4％多聚甲醛通过血管系统灌注以获得大鼠大脑最好的固定。
（1）在手术之前，通过腹腔注射阿佛丁维持麻醉。
（2）一旦动物到达手术所需的麻醉程度，将其放在手术盘上。
（3）在肋骨下方的体表和腹壁做一个5-6厘米的侧切口。小心地将肝脏与隔膜分开。
（4）使用弯曲的钝剪刀在隔膜上做一个小切口，沿着肋骨的整个长度继续隔膜切口以暴露胸膜腔。
（5）沿着肋骨的一侧放置弯曲的钝剪刀，小心地移动肺部，并通过肋骨切割至锁骨。在对侧进行类似的切割。
（6）抬起胸骨，仔细修剪连接心脏的组织。用止血钳夹住胸骨尖端，将止血钳放在头上。
（7）将灌注针从心尖处扎入左心室，使用止血钳夹住心脏，可以固定针头并防止泄漏。
（8）使用剪刀在动物的右心房切开，以尽可能大的出口，而不会损坏降主动脉。此时动物即准备好灌注。
（9）灌注生理盐水至肝脏变白后换4%多聚甲醛毒继续灌注，完成灌注后，大鼠应为僵硬状态。
（10）解剖:利用剪刀取下头部从颈部到鼻子沿着体表做一个中线切口，露出颅骨。
（11）修剪剩下的颈部肌肉，露出颅底;使用剪刀或咬骨钳去除任何残留的肌肉。
（12）将一把剪刀的尖端放在一侧的枕骨大孔上，小心地沿着头骨的内表面滑动剪刀。
（13）切割延伸到后颅骨表面的远端边缘，在对侧进行相同的切割。使用咬骨钳清除小脑周围的头骨。
（14）当尖端从背侧远端后角移动到颅骨的远端前缘时，小心地沿着颅骨内表面滑动剪刀，在切割时注意防止损坏大脑。
（15）使用弯镊子将颅骨的背面剥离远离大脑。
（16）轻轻地将大脑从头部取出，并将其放入一瓶含有至少10倍于大脑本身体积的固定液中。
（17）将大脑置于4°C固定液中24小时并适时转动。
灌注效果：灌注成功的最初指标是实验动物的四肢的颜色及僵硬度。大脑的大体检查显示血管无血液，在用于染色和组织切片中也是如此。灌注结果的最终指标是组织中超微结构的状况。
