微生物核酸提取的操作步骤

操作步骤 (请自行准备无水乙醇、异丙醇和灭菌 1.5mL 离心管) :

1. 取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液 A:21mL 加入 9mL 无水乙醇;42mL 加入 18mL 无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液 B:18mL 加入 42mL 无水乙醇;36mL 加入 84mL 无水乙醇,混匀。

2. 取 1.5mL 离心管,加入 200μL 血液或其它样本,再加入 180μL 裂解液及 20μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴 10 分钟。

3. 加入 400μL 异丙醇,混合均匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液;

5. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内,静置 1 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

8. 按每份样本 30μL 取洗脱液(如 10 份提取样本,即取 300μL 洗脱液),放置于灭菌 1.5mL 离心管,65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 灭菌离心管内,在吸附柱中心加入 30 μL 预热洗脱液,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,收集核酸溶液,提取的核酸即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。裂解液如拆封后未使用完毕,应及时旋紧管盖,密闭保存。

2. 单次血液样本用量一般为 200μL,如血液量较多,请使用 BIOG 中量全血核酸提取试剂盒。

3. 为防 RNA 酶污染,实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用处理过的无 RNA 酶的容器和无 RNA 酶的超纯水。

4. 提取的 DNA 如暂不使用,应-20℃保存,RNA 应-70℃保存,可适当加入 RNA 保护因子(货号:51090,一般 50μLRNA 溶液加入 2μL)。

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