身为分子生物学实验的小白，今天分享一下做PCR的“乐趣”！！！
不知道你有没有发现，咦？我的PCR为什么没有扩增出条带？反正我是遇到过，前前后后浪费了将近约2h的时间，结果却是：Nothing!只有Maker条带。很是苦闷呐！于是我查资料，问师兄师姐，谢天谢地，终于有了结果。
现在把一下经验分享给大家：
1.引物设计：引物设计一定要具有特异性，网上也介绍了许多引物设计软件，不过我觉得傻瓜软件——snapgene就挺好用的，设计起来也非常方便，还可以自行模拟PCR结果，看引物设计的是否合理
2.模板浓度：这个的话，根据实验室所用的聚合酶说明书就可以了，对于质粒的话，10ng以内就可以的
3.水的选择：一定要是灭过菌的去离子水或双蒸水，不要用蒸馏水哟
4.泡泡：PCR反应最好别有气泡，有的话，可以用手轻弹，短暂离心一下
3与4都是一些小细节，但是忽略了就有可能做不来实验了，曾经我就犯过这样的错误，导致最简单的16s序列都没有P出来。
5.退火温度：一般55℃就可以的，我的建议是，当你确定前四条都没有问题的时候，再去考虑退火温度的问题，可以选择降落PCR来确定最佳的退火温度
6.酶的选择：对于选择哪个聚合酶，我还是相信品牌的，推荐PrimeSTAR系列（实验室师兄推荐的，我也用过，觉得效果不错），附网站链接：
https://www.takarabiomed.com.cn/ProductShow.aspx?m=20141215102916640154&productID=20141226142531140921
好了，关于PCR反应的感悟目前就是这些，以后再分享其他的有关分子实验的内容......
附此图，希望学生物的学生可以“笑着活下去”，哈哈哈......再会喽。
