1.思维导图
2. 一代测序
sanger法测序(“双脱氧终止反应法”,观看):顾名思义,DNA在聚合酶的作用下进行无数次合成,每次到了ddNTP就终止,这样就得到不同长度的序列,每个序列的末端就是带有荧光标识的ddNTP,这样每次只测一个ddNTP,就能反推到序列了。
需要以下材料
- DNA模板
- 只有5‘端的带荧光的dNTP 即ddNTP
- 引物(打开反应的钥匙,并起到在特定的点开始聚合)
- DNA聚合酶
- 4种dNTP
3. 二代测序(Illumina公司:边合成边测序)
需要:
DNA文库:把基因组DNA打断,然后再许多的DNA片段两头加上了接头。(接头序列已知,但中间插入的DNA片段序列未知)
flowcell :8条通道,并做了化学修饰(两种DNA引物种在上面,引物和DNA文库的接头(adapter)序列互补),当DNA液体流过flowcell时,接头和引物配对的序列不会被冲走。
桥式PCR:将文库种到flowcell上,并进行扩增
测序:和一代测序类似,(但是一个循环后,会使用酶将3’端的羟基暴露出来)
index:在adapter里面(还需要进一步体会)
4. 三代测序
PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies 的纳米孔单分子测序技术为代表 (不懂0.0)
5. 专有名词
基因组学(即核酸的序列分析)
全基因组
全外显子组
简化基因组
转录组(基因表达分析)
mRNA-seq
。。。
蛋白组学
代谢组学
一周的学习完成,感谢小花花和小豆豆老师!OVER~