CLIP的研究方法

CLIP的英文全称为cross-linking immunoprecipitation,即交联免疫沉淀

是一种利用紫外交联技术,将RNA与蛋白之间互作的弱作用力(如范德华力、氢键)转化为强作用力(共价键),并连用免疫沉淀,探究RNA与蛋白互作位点的分子生物学技术。基于CLIP技术可以在整个转录组水平上检测RNA结合蛋白的结合位点或RNA修饰(m6A)位点。

image

CLIP的基本实验流程:

1紫外交联细胞,使RNA与蛋白之间形成共价结合。

2用特异性抗体调取特定蛋白与RNA复合物。

3用RNase消化掉没有结合蛋白的RNA,并用RNA连接酶连接3’端的接头。

4用蛋白酶K消化掉RNA结合蛋白,释放RNA。

5用PNK将5’磷酸集团转变为5’羟基,用RNA连接酶连接5’端接头。

6提取RNA,反转录并进行高通量测序。(蛋白与RNA交联处的核酸配对会发生突变)

clip大体流程

CLIP根据细胞处理方式和检测方式的不同,分为HITS-CLIPPAR-CLIPiCLIP

HITS-CLIP也称为CHIP-seq,即通常所说的CLIP。将紫外线交联和免疫沉淀与高通量测序结合,以鉴定RNA结合蛋白的结合位点。该技术可用于检测特定RNA结合蛋白的RNA结合位点,或利用m6A抗体检测RNA修饰(m6A)位点,也可用于检测AGO2的靶标microRNA。

image

PAR-CLIP

PAR-CLIP(photoactivatable ribonucleoside–enhanced cross-linkingand immunoprecipitation)该技术与普通CLIP的区别在于实验前细胞需加入核苷类似物如4-硫嘌呤(4-SU)或6-硫鸟苷(6-SG)(核苷类似物具有毒性),交联4-SU或 6-SG类似物分别导致胸苷到胞苷,鸟苷转化为腺苷转换。4-SU替代发生在每40个尿苷核苷中的大约1个中,并且T到C的转换频繁地发生在交联位点因此,PAR-CLIP可以高精度地识别结合位点。该技术主要用于检测含有微量RNA的核糖核蛋白的结合位点。如miRNP-AGO2/TNRC6

image

iCLIP

iCLIP(individual nucleotide–resolution cross-linking andimmunoprecipitation)是一种单核苷酸分辨率的CLIP。该技术与普通CLIP的区别在于RNA结合序列5’端的接头是通过成环连接上去的。该方法相较于其他两种CLIP更为精确,可以精确到单个结合碱基。


iCLIP的流程
各种clip的区别
©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 194,319评论 5 459
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 81,801评论 2 371
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 141,567评论 0 319
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 52,156评论 1 263
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 61,019评论 4 355
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 46,090评论 1 272
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 36,500评论 3 381
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 35,192评论 0 253
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 39,474评论 1 290
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 34,566评论 2 309
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 36,338评论 1 326
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 32,212评论 3 312
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 37,572评论 3 298
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 28,890评论 0 17
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 30,169评论 1 250
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 41,478评论 2 341
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 40,661评论 2 335

推荐阅读更多精彩内容