高通量细胞计数仪的基本原理是将待检样品通过流式系统连续传送到光学检测区域,采用一定的探测器对细胞进行激发并测量细胞在不同光学参数下的特性。具体步骤如下:
1.激发光源:使用激光或LED等光源产生单一或多种波长的光。这些光将通过光束整形系统,使其获得理想的光束形状。
2.样品注射:样品通常被稀释并加入试剂,以保证细胞在流动时不会黏连在一起。样品通过注射器被注入到装有缓冲液的注射器中,并通过压力控制一定的流速。
3.水平排列:通过加速流体以及流体的层流自动调整,使细胞在流动时保持单个、水平排列的状态,方便激发光的入射和测量。
4.激发和测量:选择特定的滤光片、光栅和透镜组合来引导激发光通过细胞,并测量光的散射、发射、吸收等特性。激发光在细胞表面相互作用并发生散射或激发产生荧光。根据光的强度、散射角度、发射光的波长等参数,可以推断细胞的大小、形状、颜色等信息。
5.数据处理:收集到的数据将被发送到计算机进行处理。计算机根据设定的阈值和标准,对细胞进行计数、分类和分析。各种特征数据可以通过软件进行可视化显示和输出。
高通量细胞计数仪的应用:
1.细胞培养过程中,监测细胞的生长情况和浓度变化。
2.通过细胞计数,可以估算细胞的增殖速度、存活率以及死亡率等。
3.评估药物对细胞的影响,如细胞毒性测试、细胞增殖抑制实验等。
4.临床样本的细胞计数和鉴定,如血液检测、尿液分析等。
5.评估病菌或微生物的浓度,以判断生物实验室环境的安全状况。
6.也可以用于测量植物细胞的数量以及相关参数,如细胞体积等。
总的来说,高通量细胞计数仪在生命科学的研究和实验中有着广泛的应用,可以快速、准确地计数大量细胞,并为研究提供可靠的数据基础。