免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）利用抗原-抗体的相互作用来显示组织切片中抗原（例如蛋白质）的分布和定位。这种实验的独特之处在于它既直观的显示了蛋白在组织及细胞或细胞亚结构的定位，又保留了组织样品的结构特征，该方法对于诊断癌症等疾病的异常细胞极为有用，因此该实验方法得到广泛应用。
但是，实验并不是做出来就结束了，更重要的是我们要对结果进行分析统计，以得出实验的结果结论。要想获得理想的实验结果，标准的实验操作步骤是第一步，合适的分析方法是第二步。
下面小编为大家介绍一下免疫组织化学常用的分析方法之一：使用Image J软件进行IHC score分析
IHC score是处理免疫组化结果的一种组织学评分方法，将每张切片内阳性的细胞数量及其染色强度转化为相应的数值，达到对组织染色半定量的目的。目前该方法也被多数高分文章所采用认可[1-3]。
标准评分为：
根据细胞染色强度评分为4级：
阴性，计0分；
弱阳性，计1分；
阳性，计2分；
强阳性，计3分。
根据阳性细胞百分比评分为4级：
0%≤阳性细胞百分比≤25%，计1分；
25%<阳性细胞百分比≤50%，计2分；
50%<阳性细胞百分比≤75%，计3分；
75%<阳性细胞百分比≤100%，计4分。
IHC score = 细胞染色强度评分 x 阳性细胞百分比评分
跟着小编的节奏，我们来演示操作一下。
第一步：计算细胞染色强度评分。
首先，我们需要下载Image J的插件IHC Profiler（https://sourceforge.net/projects/ihcprofiler/）。
（1）以细胞质染色的IHC图为例：
打开图片和插件（Plugins → IHC_Profiler）：
打开插件后选择细胞质染色的Mode：
颜色去卷积默认H DAB染色：
然后即可分别得到阴性区域和阳性区域，直接得出结果：
由结果可得，该IHC图的细胞染色强度评分为弱阳性，计1分。
（2）以细胞核染色为例：
打开图片和插件（Plugins → IHC Profiler）：
选择细胞核染色Mode：
颜色去卷积默认H DAB染色：
并不会直接得出结果，需要先设定一个阈值：
然后再次点击Plugins的IHC Profiler Macro（Plugins → IHC Profiler Macro），即可得到结果：
由结果可得，该IHC图的细胞核染色强度评分为阴性，计0分。
第二步：计算阳性细胞百分比（以上述细胞质染色的IHC图为例进行后续操作）。
打开图片，并将图片格式转换为RGB Stack（Image →type→RGB Stack）：
将进度条拉至中间位置：
点击Threshold进行阈值的调整（Image→adjust→Threshold）：
点击Analyze的Set measurements进行计算内容的选择（Analyze→Set measurement→Area、Mean gray value、Area fraction）：
点击Analyze的measure，出现的%Area即为阳性细胞百分比。
由结果可得，该IHC图的阳性细胞百分比为19.739%，阳性细胞百分比≤25%，计1分。
综合，该IHC图的综合IHC score得分为：1（细胞染色强度）*1（阳性细胞百分比）=1分。
参考文献
[1] Meng J, Liu Y, Han J, Tan Q, Chen S, Qiao K, Zhou H, Sun T, Yang C. Hsp90β promoted endothelial cell-dependent tumor angiogenesis in hepatocellular carcinoma. Mol Cancer. 2017 Mar 31;16(1):72. doi: 10.1186/s12943-017-0640-9IF: 37.3 Q1 B1.
[2] Xu Q, Liu X, Liu Z, Zhou Z, Wang Y, Tu J, Li L, Bao H, Yang L, Tu K. MicroRNA-1296 inhibits metastasis and epithelial-mesenchymal transition of hepatocellular carcinoma by targeting SRPK1-mediated PI3K/AKT pathway. Mol Cancer. 2017 Jun 12;16(1):103. doi: 10.1186/s12943-017-0675-y IF: 37.3 Q1 B1.
[3] Lin XM, Hu L, Gu J, Wang RY, Li L, Tang J, Zhang BH, Yan XZ, Zhu YJ, Hu CL, Zhou WP, Li S, Liu JF, Gonzalez FJ, Wu MC, Wang HY, Chen L. Choline Kinase α Mediates Interactions Between the Epidermal Growth Factor Receptor and Mechanistic Target of Rapamycin Complex 2 in Hepatocellular Carcinoma Cells to Promote Drug Resistance and Xenograft Tumor Progression. Gastroenterology. 2017 Apr;152(5):1187-1202. doi: 10.1053/j.gastro.2016.12.033 IF: 29.4 Q1 B1.
