ATAC-seq数据分析流程

jimmy大神的教程对我还是有点难度,主要是直接操作xshell水平不太够

使用xshell+winSCP操作

一、数据下载

wget sra数据网址

#拆分

fastq-dump -- gzip -- split - files SRR

二、质控

#!/bin/sh

fastp -i test_R1.fastq -I test_R2.fastq -o outtest_R1.fq.gz -O outtest_R2.fq.gz

三、比对

#!/bin/sh

bowtie2-build -f genomic.fna.gz --threads 24 pig(物种名)

bowtie2 -p 10 -x ../bidui/pig -1 outtest_R1.fq.gz -2 /outtest_R2.fq.gz -S test.sam

samtools view -F 4 -Su test.sam  | samtools sort -T 11111 -o test_sort.bam

samtools index test_sort.bam

#(sort.bam为排序后的bam)

#查看比对率

#!/bin/sh

qualimap --java-mem-size=50G bamqc -bam test.bam -outdir ../ -outformat PDF:HTML

四、去除线粒体、PCR重复等

#!/bin/sh

gatk  MarkDuplicates \

-I test.bam -O test.picard.redup.bam --REMOVE_SEQUENCING_DUPLICATES true -M test.log

samtools index test.picard.redup.bam

samtools flagstat test.picard.redup.bam > test.rmdup.stat

samtools view -h -f 2 -q 30 test.picard.redup.bam |grep -v chrM|samtools sort -O bam -@ 5 -o - >test.last.bam

samtools index test.last.bam

samtools flagstat test.last.bam > test.last.stat

bedtools bamtobed -i test.last.bam > test.bed

五、peaks calling

#!/bin/sh

ls *.bed | while read id ;do(/nfs3/wanghlab/anaconda3/envs/chip/bin/macs2 callpeak -t $id -g mm --nomodel --shift -100 --extsize 200 - n ${id%%.*} --outdir ../);done

后续步骤晚些再写

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