如同许多速冻柜其他生物一样，使用冷冻保护剂如或甘油例如丝状真菌甘油或酵母甘油。 选择冷冻保护剂之间的差异是物种或类别依赖性的，但通常对于渗透冷冻保护剂如甘油或聚乙二醇的真菌是最有效的其他非穿透性的包括糖甘露醇，山梨糖醇，葡聚糖等。 不推荐冻融重复，因为它会降低生存能力。 推荐使用备用深度速冻柜冷冻机或液氮储存地点。
冷冻速冻柜的多种方案总结如下每个使用螺帽聚丙烯非芽孢真菌或包埋的菌丝体：向管中加入甘油并加入新鲜速冻柜培养物的琼脂塞并立即在液氮蒸气 的解冻和电镀。 细菌许多常见的可培养的实验室菌株被深度冷冻以保存遗传和表型上稳定的长期储备。 亚培养和延长的冷藏样品可能导致质粒或突变的丢失。
常见的最终甘油百分比是.从新鲜的速冻柜培养板中选择一个感兴趣的单个菌落并进行液体培养。 从液体培养基中，将培养基直接与等量的甘油混合; 应该检查菌落是否有突变等缺陷。 所有抗生素应在速冻柜长期储存前从培养物中洗涤。
