最近遇到了一个售后,客户在使用IGV时遇到问题,我之前也没有用过此软件。现在便把安装过程记录一下。
IGV(The Integrative Genomics Viewer)这是一个在本地电脑上就可以对测序数据进行可视化的工具。
下载与安装:
IGV下载网址:
http://software.broadinstitute.org/software/igv/download (有Windows,MAC,Linux系统对应的版本)如图1
图1
要求Java版本是8.0的。
安装Java 8.0后,下载Windows版本。右键以管理员身份运行IGV_Win_2.5.3-installer.exe.
双击IGV图标,首次打开会下载human的参考基因组。
可以选择参考基因组。(图2)
图2
也可以从本地以及服务器中导入参考基因组。(如图3)
图3
选择Genomes->Load Genomes From Files 导入本地的基因组fa文件。
- 导入bam
bam文件是经过sort的。File->Load from File。如图4.
图4
bam文件的路径下同时存在bam文件的索引,后缀.bai。如图5.
图5
- 导入gtf文件。
从本地导入gtf文件。gtf需要是经过sort之后的。可以通过IGV自带的工具转换。Tools Run Igvtools。
如图6 选择sort,然后选择gtf文件,点击Run。
图6
**结束后,File **Load from File,选择sort.gtf。载入IGV。
也可以从UCSC网站中下载。
进入UCSC网站:http://genome.ucsc.edu,选择Table Browser 然后点击下载注释文件如图7。
图7
选择想要下载的注释文件,我这里选择的是hg19的gtf文件。如图8
图8
查看bam文件。如图9 。
图9
Tracks:
载入bam文件后会产生3个相关的tracks:
Alignment track :显示每个的reads的比对情况
Coverage track:显示测序深度
Splice Junction Track:跨越剪切位点(spanning splice junctions)的reads视图。
Splice Junction Track 可以通过设置,使其在IGV视图中展示或者隐藏。右键选择Show 或者Hide。
图10
Coverage Track:
默认情况下,IGV动态计算并显示比对文件的默认覆盖率。当IGV被放大到比对的reads可见性阈值(默认为30 KB)时,覆盖率跟踪将显示每个track的读取深度,显示为灰色条形图。如果reads中某核苷酸与参考序列超过20%不一致时,IGV会根据每个碱基的读计数(A, C, G, T)对条形图进行着色。
图11
Insertions
IGV用紫色I()或红色I表示Insertions,将鼠标悬停在插入符号上以查看插入的碱基。如图11示:表示4个碱基插入。
图12
下图表示该位点有可能是SNP突变:
图13
黑色横线表示有缺失:横线上的数字表示缺失碱基的个数。
图14
Splice Junction Track:
Junction 来自于正链用红色表示,来自于负链使用蓝色表示。
图15
更多详细信息见:
http://software.broadinstitute.org/software/igv/UserGuide
参考资料: