1.碱裂解法提取质粒DNA

碱裂解法提取质粒DNA主要是利用质粒DNA本身属于双链环状结构，在强碱的作用下变性后，中和即可复性，迅速准确的恢复，而染色体DNA就不可以，以此分离。

一个实验，原理和步骤可以很简单的写下来，但是真正有难度的是理解每种试剂的作用，尤其是混合溶液，比如本实验中，在用酸进行中和后，为什么要再次用酚、氯仿、异戊醇再次进行抽提，以及为什么要用酚、氯仿、异戊醇，可以用其他的有机试剂代替吗？ 那么他们分别有什么作用呢，为什么要混合使用，不分开使用呢？

再次用他们抽提的原因是sds与钾离子产生的沉淀，并不能完全沉淀所有的蛋白质，有的蛋白质需要再次用有机溶液沉淀，酚是起主要作用，若仅加酚溶液，在密度大的盐溶液中，酚就会在溶液上层，不利于质粒的提取，氯仿可加大酚、氯仿的密度，其次酚的水溶性较大，与上清液抽提时，有些酚会跑到上清液中，氯仿的加入可以使有机相和水相完整的分离开，而异戊醇是为了水相与有机相这个界面更清晰。

这是在网络上某个大神总结的建裂解法里说到的，这篇文章还说到，实验，不是看书，而是去做，我想在做实验过程中，一定会遇到各种各样的问题，最终导致结果不正确，这时候，搞清楚每一步的原理，就能对症下药。

另外，这千篇一律的实验中，一定包含某种规律，有严谨的步骤，也有活跃的思维，搞清楚实验设计者的思路，搞清楚每一个实验行为背后的意义，才能够做到不仅仅是读书而已。

2.碱性磷酸酶的Km值和Vmax值的测定

关于这个实验，生物化学书上涉及得也很多，更多的是原理类的，介绍米氏方程，这个实验是直接测量米氏常数，以及Vmax。

影响一个化学反应速度的因素有很多，其中底物浓度就是一个，但是米氏方程只应对与底物只有一个，也就是一级反应（或拟一级反应，即其中另一个反应物过量，其变化可以忽略不计），对于二级反应，两个变量就似乎不能使用米氏方程，但是可以使其中一个反应物过量，使之成为拟一级反应，就可以计算了吧。

这个实验求Km值和Vmax值，就是要把双倒数法的米氏方程来计算，主要是要画一个以浓度为横坐标，反应速率为纵坐标的直线图，求出图中与x轴和y轴的交界点就可以求出Vmax和Km值。

对于酶的实验来说，主要是根据其产物的生成量和时间来求速度，产物的量根据产物的不同性质有不同的检测法，对于可以吸收光的物质来说，可以检测其在某波长下的吸收值，根据值的大小推测某产物的量。

对于实验来说，我们可以先求不同浓度下，反应时间不同的产物的吸光值，先画出以时间为横轴，吸光值为纵轴的图，根据标准曲线，把吸光值换算为浓度，算出某底物浓度下反应的速度，由于在一定底物浓度范围内，化学反应的速率不变的，即可以把这个速度看做瞬时速度，求出不同浓度下的这个速度，即画出以浓度为横坐标，速度为纵坐标的图。

总的来说，整个实验说的轻巧，但是里面很多的细节和更深层次的东西没有搞清楚，不去做实验的话，应该很难吧。

最怕的就是，一个实验看下来什么问题也没有，自以为懂了懂了，所谓的懂，就是最大的不懂。

这个实验中，为什么要用对硝基酚磷酸盐溶液，碱性磷酸酶的作用底物不是对硝基酚磷酸吗，猜测可能是因为对硝基酚磷酸盐更稳定，所谓碱性条件下，到底是ph多少呢？要用碳酸钠-碳酸氢钠调节ph是因为这样的ph更加稳定吗？

3.枯草杆菌蛋白酶活力的测定

这个实验，是枯草杆菌蛋白酶将酪蛋白反应为酪氨酸，酪氨酸再在酚试剂的作用下变成蓝色化合物，可以在680nm处下有最大吸光值。 z

这个实验可以告诉我们，就算一个化学方程的产物本身不能有吸光值或者什么，可以想办法找到另外一个和它一一对应的产物，当然这个道理高中就学了哈哈哈哈。

这个实验的后面，要做对照组，也要做空白组，对照组和样品组只是加的顺序不太一样，一个加样品加酶加终止液，一个是加样品加终止液加酶，这个作为对照组排除了加的试剂本身对实验结果的影响。

空白组就是加仅仅加酚试剂和加碳酸钠，作为分光光光度计的空白管，我感到疑惑的是，为什么？ 为什么空白管不是加酚试剂加碳酸钠加三氯乙酸加酶？ 今天看的文献里面也有找到最佳的空白管对照的，这个我还以为是把所有其他的不相干的都作为空白管，看来不是。那么是不是因为三氯乙酸本身对吸光值的贡献不大，所以加不加都无所谓，有可能吧。

所谓空白管就是为了测量除了待测样品以外的其他的溶液的吸光值，再对比加了样品后的吸光值，从而得到样品的吸光度，按这个道理，应该是其他的都要加进去才对。

4.文献：中药木瓜中总糖和还原糖的测定

随便找的论文来看，这个论文挺简单，看来写一篇论文并非需要多难，多高深莫测，万事都可探究，这篇论文显示开头先介绍了一下木瓜什有些什么用，在介绍了一下木瓜中的糖什么什么的，多糖减去还原糖的量就是多糖的量，但是她的题目又没有提多糖。测糖用的方法是比色法，但是因为是测的总糖和还原糖这种大类的糖，用的是葡萄糖作为标准曲线，这样，无论如何也只是检测糖含量的大体数量，对于只求大概的实验来说还是可以的。

论文的结论是：在进行还原糖测定的时候，在560nm出测定其吸光值、保温5min、加5ml的DNS可以得到最佳的比色。测定这些数据的依据是在560nm处有最大吸收光值（还有其他因素，但是我没看懂），5min时得到的产物达到峰值，5mlDNS的产物显色最稳定，方法是一系列梯度下，如不同的波长下的吸光值，不同保温时间的产物量，不同量DNS的比色。

后面作者还做了一个精度检测，检测她的仪器 ，做了一个显色稳定性，一个小时内较稳定，总的来说是一个中规中矩的简单的实验，当然我初学者适合这样的论文。

5.文献：不同提取方法对甜茎中总糖和还原糖提取方法的差异，

跟上面那篇差不多，而且实验方法很简单，结论也很简答，也没有仔细看。

今天算完成任务，还想搞搞其他的呢。