影片以狗狗贝利的视角讲述了它的几世的使命，它和不同的主人体验着不同的人生，但从未忘记自己最初的主人伊森，它几经周折回到主人身边，让主人得到幸福，实现了自己最初的使命。
新斯科舍猎鸭寻回犬贝利被人抓走锁在车里然后离开，天气炎热，后排的贝利脱水奄奄一息，伊森和他的母亲路过发现了贝利并救了它一命，贝利最终被伊森一家收养。贝利很调皮，常常无意中惹爸爸生气，伊森总是替它求情，帮贝利收拾残局。在伊森爷爷奶奶农场，贝利找到了一个干瘪的橄榄球，这是贝利最喜欢的抛球游戏，伊森蹲下，贝利踩在他的背上腾空跃起，潇洒地接球。那个夏天伊森遇到了生命中的最爱-汉娜，两人度过了一段甜蜜的时光。后来因为种种原因，伊森将汉娜从身边推开，两人去了不同的大学，继续着不同的人生，贝利能感觉得到伊森的思念，遗憾的是贝利老了身患重病，最终被安乐死，没能继续陪着伊森
下一世的贝利变成了一个女孩，一只名叫艾莉的德国牧羊犬，它的主人很严肃但也很爱它，是一名警官，艾莉在他的训练下渐渐成长为优秀的工作犬，陪伴主人出生入死，最后为了保护主人而牺牲在歹徒的枪下。
在下一世贝利是一只名叫蒂诺的柯基犬，用贝利自己的话来说，这一世它过得很幸福。它和主人很有默契，总能知道对方想吃什么，后来主人恋爱了，而蒂诺也对对男主人的卡西尔一见钟情，一对人，一对狗，恬静幸福地相伴到老。
最后一世的贝利是一只圣伯纳犬，他的主人是个心地善良的女孩，但是经济拮据，刚回家就被男主人嫌弃，它整天被拴住院子里，没有散步，没有游戏，没有洗澡，直到被男主人遗弃。贝利很迷茫，但是它也不想回到那个家，它很想念伊森想回到伊森身边，它顺着伊森特有的味道找到了独居在农场的伊森，它最终被伊森收留取名为巴蒂，伊森很孤独，他在思念一个人-汉娜，偶然间巴蒂在公园闻到了有些熟悉的味道，那是汉娜的女儿，它跟着她找到了汉娜，对汉娜一阵亲热，汉娜通过巴蒂的狗牌把它送还给了伊森，之后的事情就是两人重逢，结婚幸福第生活在一起了。巴蒂的最后一个心愿是想让伊森知道它就是贝利，它找到了当年干瘪的橄榄球通过独特的跳跃姿势让伊森知道了真相，实现了自己的心愿。
贝利的几世轮回各有不同，但和主人都有着各式各样的情缘，尤其是第一位主人伊森，尽管对伊森来说，贝利已经永远地离开他了，在之后大漫长岁月里，渐渐步入老年的伊森宁可一个人孤独也在也没有养狗，贝利对他来说是不可替代的家人，人狗情未了，多年之后贝利和他重逢再续情缘。
《一条狗的使命》不仅仅讲狗的故事也是人的故事，不同阶层的人们的生活状态，对待生活的态度，他们的喜怒哀乐，他们的平凡而又不平凡的人生。善待身边的动物，善待身边的人，对他们多点关心多点爱。
