目录
辨明种类：抗体投诉类型 1
如何处理：出现问题的可能原因 1
收集数据：针对性分析评估 2
提出建议：可以怎样解决 3
辨明种类：抗体投诉类型
出现非特异条带
检测不到目的条带
灵敏度不高
如何处理：出现问题的可能原因
1. 对于多肽作为免疫原：
因为多肽结构与蛋白不同，不保证后续应用实验（IP WB等）100%成功；用蛋白免疫制备多抗和单抗，我们保证针对免疫原WB阳性，不保证针对客户內源蛋白WB阳性。
所以以多肽为免疫原可能检测不到目的条带，也可能由于检测原复杂，含有和多肽序列同源的序列，出现非特异性条带。
2. 如果客户要制备抗血清：
后续做WB、IP等应用实验，需要提示客户抗血清成分杂多，存在检测效果不理想的风险，建议制备纯化抗体，但若客户后续自己进行纯化则可不做抗体制备建议。
所以以抗血清做WB等实验，容易出现非特异条带和灵敏度不高的现象。
3. 若客户提供的蛋白经生产部门检测不合格：
需邮件告知客户不合格蛋白免疫风险，或建议客户重新提供蛋白，或建议取消订单。
否则，如果客户本身蛋白纯度不够，容易出现非特异性条带；如果客户蛋白容易降解，可能也会出现非特异性条带，或灵敏度不高等情况。
所以客户蛋白不合格，后续抗体不做任何保证，检测出现任何问题也都有可能。
4. protein A/G纯化来制备多抗：
会把血清中所有免疫球蛋白都纯化下来，特异性针对免疫原的抗体只占protein A/G纯化抗体中一部分，所以可能产生非特异条带。
5. 胶条作为免疫原：
在客户没有足够的可溶蛋白，只能提供胶条的情况下，我们不能保证抗体效价和得率：因为胶条中含有其他杂质，这些杂质会对目的蛋白免疫应答产生影响，最终会影响血清效价和抗体得率。一般客户在提供胶条的同时会提供少量可溶蛋白作为Elisa和WB检测原，但我们也只是提供检测报告，不保证检测结果。
所以客户提供胶条免疫，后续抗体不做任何保证，检测出现任何问题也都有可能。
6.免疫原是抗原性小于0.6，与免疫动物的同原性大于90%的多肽；或者是含有小于三条抗原肽且抗原肽的抗原性都小于0.6，或与免疫动物的同原性大于90%的蛋白：
这种情况都会推荐定制化套餐，按步收费，中间提供小样给客户检测，也是帮客户最大程度降低风险。但存在后期免疫无效价或效价低的风险，更无法满足客户应用。由于抗原本身抗原性低，刺激免疫应答能力弱；和宿主的同源性较高，被动物机体识别、抗原递呈细胞APC的递呈效果较差（同源性问题在小鼠项目中会增加打破免疫耐受）。
所以这种情况是免疫原本身决定了项目难度较大，不保证结果 ，根据实验结果确认时候推进后续步骤。
收集数据：针对性分析评估
1. 询问客户是否做阴性对照、阳性对照；检测用蛋白和抗体是否做了三个以上的浓度梯度；检测物质和抗原是什么关系。
其中，阴性对照和阳性对照是为了证明客户的样品、试剂和实验条件等没有问题，排除其他因素的干扰；
用不同浓度做梯度是为了得出较好的实验用浓度，排除稀释度不同造成的假阴性结果；
检测物质如果是内源性蛋白，检测结果不做保证；非定制化套餐中，检测物质如果是免疫原蛋白，我们保证WB阳性和ELISA效价；非定制化套餐中，检测物质如果是免疫用多肽，保证Elisa阳性（单抗）或Elisa效价（多抗）。
2. 若上述仍无法解决，需要客户提供订单号、实验步骤、检测图（图中需要有marker、阴性对照、阳性对照、梯度浓度的检测样本信息(需说明该样本和免疫原有什么关系)、检测用抗体的信息），收集信息后发给负责订单的TAM、PM和生产管理人员。
提出建议：可以怎样解决
1.灵敏度不高或者背景较高的原因及建议
若用抗血清检测——建议尝试纯化为抗体；
检测原浓度过高——增加检测蛋白稀释倍数。
2. 出现非特异性条带可能的原因及建议
目的蛋白有多个修饰位点（磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等），本身可以呈现多条带。或者目的蛋白有其它剪切本——查阅文献或生物信息学分析可能性。
查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。
样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作。
上样量过高，太敏感——适当减少上样量。
抗体特异性不高——和抗原相关，重新选择或制备高特异性的抗体。
一抗或者二抗浓度偏高——降低抗体浓度。
3. 检测不到目的条带或灵敏度低可能的原因及建议
检测样本不表达目的蛋白——选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性。
检测样本低表达目的蛋白——提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。
抗体不能识别测试种属的相关蛋白——免疫原和检测原存在差异，重新选择抗原进行免疫（例如，选择其他多肽抗原，或者换为蛋白免疫，或者置换蛋白表达系统，或者做定制化套餐，中间用检测原检测中间产物来确定实验是否继续）。
