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1、畜禽常用检测方法

抗原检测,即病原诊断技术(普通PCR、荧光定量PCR、ELISA、基因DNA测序技术、SDS-PAGE和免疫印迹、胶体金);

抗体检测,即血清学检测(ELISA、中和抗体效价检测、毒素检测、间接免疫荧光、胶体金);

细菌或细胞学实验(细菌染色、细菌病变及毒介测定、细菌及病毒分离培养、细菌生化实验、细菌药敏试验)。

实验室主任-陈博士

2、核算检测的原理:试管中进行的DNA复制反应,依据—DNA半保留复制的机理;体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质;通过人为控制体外合成系统的温度:⑴双链DNA变成单链;⑵单链DNA与人工合成的引物退火;⑶DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA.已知病原序列,通过碱基互补配对,变性、退火和延伸的过程扩增或分子杂交到一定数量级,从而确定病原。其方法有聚合酶链式反应、恒温扩增核酸诊断技术、环介导等温核酸扩增技术、DNA测序技术和基因芯片。

国测总经理-杨总

3、荧光定量PCR (探针法)的优势与应用?

可完成快速多重检测;操作时间短,大通量;定量:确定发病标准;数据化,可比对分析;鉴别诊断,区分野毒;疫苗质量含量的评价;动保产品的临床评估。

4、影响PCR结果的因素:核酸的提取;引物的设计;试验的污染。总之核酸是生命物质,有四种核苷酸组成了DNA双螺旋,利用分子生物学的方法对核算进行体外扩增和检测,PCR可定性病原,不能辨别死活,不能检灭活苗,荧光定量更灵敏,可定量分析病原的载量,荧光定量探针法可进行毒株间的鉴别。

5、普通PCR逐步被淘汰的原因?

普通PCR 需要经过后续的跑胶来检测目的片段的存在与否

此方法费时费力

结果判定敏感性低

极易污染

对人体健康也有伤害

6、荧光定量PCR 的用途及特点?

一种改良的病原检出手段。其特点表现有可定性、可定量;窗口期短;敏感性更高;特异性更强;污染更容易控制。

7、兽用临床检测技术的两大发展趋势?

自动化——适应于大型中心实验室,大型流水线,高检测通量,检测结果精准,同时也要求能够在最短的时间内获得结果。

现场检测——床旁诊断设备POCT,操作简便(简单的前处理或者不需要前处理),不需要过多辅助设备,快速出结果,结果尽量精准。

培训学院李院长

8、核酸提取的原理和步骤?

简单地讲,核酸抽提包含样品裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程,纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

9、国测提取试剂的特点?

柱法提取:⑴DNA和RNA共提取,一次操作,满足多种试验需要;⑵可以用瞬时掌上离心机,方便现场操作;⑶无需加热。

国测免提取试剂(一步法):只需要加裂解液,即可完成全部提取过程(比煮沸法更快);操作方便,适合现场;提取过程只开盖一次,污染概率低。

一步法优势:⑴重复性好,简单的操作,减少误差;⑵污染少,使检测结果更可靠;⑶简单,一看就会,一会就能上手;快速,早出结果、早看病;轻松,劳动强度低;⑷成本低(辅材成本低,不需要加热煮沸、高速离心、过柱吸附等设备和耗材,从而节省检测成本)。

同行提取产品:性价比较高的--天根和全式金;性能好但价位高--凯杰。其他很多品牌出自代工厂家,柱法提取试剂性能差别不大。

10、国测扩增的特点:全程内标监控,避免假阴性;dUTP+UNG防污染,避免假阳性出现;多联检与鉴别诊断;操作程序统一,方便上机。

扩增曲线

扩增同行:国产--世纪元哼、达安、维伯鑫;进口--IDEXX、THERMO

11、如何评判一台荧光定量PCR设备的好坏?

⑴热循环系统:升降温快的是好设备;⑵光学系统:光源强度大的,是好设备;⑶信号处理系统:光电倍增管对较低的光信号敏感度较高。

猪警2000运行中

12、国测便携式PCR检测箱有:24孔PCR仪一台;移液器3把;枪头3盒;12000转掌上离心机1台;便携式研磨器1个。

移动检测箱

国测PCR仪器的特点:随意移动,无需校准;LED光源,寿命超长;最小重量,方便移动;4通道很稳定,无荧光窜扰;升级版升降温速度更快,半个小时可以跑完一个反应。

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