293T细胞聚团或脱落怎么处理?

人胚肾细胞293T细胞是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株,广泛用于病毒包装。其有多种衍生株,比如HEK293,293T/17等,来源都是人胚胎肾细胞,其极少表达细胞外配体所需的内生受体,且比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

人胚肾 293 (HEK 293) 细胞是生物技术和研究中常用的细胞系之一。由于 HEK 293 细胞具有较高的生长效率,通常生成用于生物医学和药物研究的外源性蛋白质。HEK 293细胞 也会被用于各种转染实验中。

细胞名称:人胚肾细胞(STR鉴定正确)

细胞简称:293T

细胞别名:Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T;  293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo

产品货号:TCH-C101

种属来源:

组织来源:胚肾

细胞形态:上皮细胞样

生长特性:贴壁生长

培养体系:DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培养基货号:TCH-G101

传代比例:1:4-1:8,每2-3天换液一次

传代周期:24-48 h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

质量检测:细菌、真菌、支原体检测均为阴性

293T细胞培养注意要点

1. 293T细胞为贴壁细胞,细胞形态呈上皮样。293T细胞贴壁能力较弱,容易脱壁,操作应该轻拿轻放。培养基及PBS均需预热后使用。推荐复苏或传代时可使用提前用0.1%明胶包被过的培养瓶/皿,换液时,注意不要用力摇晃培养瓶/皿,培养基应沿培养瓶/皿壁缓慢加入,避免直接对着细胞吹打。

2. 293T细胞消化时间较短,0.25%胰酶消化时间为60s-90s。

3. 293T细胞生长速度很快,通常倍增时间不到24h,建议当细胞生长汇合度达到70-90%时进行传代操作,避免过汇合,过汇合可能会导致细胞聚团。


293T细胞聚团或脱落处理方法

收到常温293T细胞,在镜下发现细胞聚团或脱落怎么办?

该细胞因为贴壁松散,若购买常温细胞,收货时有可能大部分细胞脱离培养瓶壁,显微镜下找不到细胞,只能看到肉眼可见的细胞团,都是正常现象。请参照以下方式处理:

1. 收到细胞后请先置于培养箱中稳定2-4个小时后再进行下一步处理,不建议放置培养箱过夜后处理。

2. 将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1100rpm,4min)。

3. 去掉上清,用PBS重悬细胞 (以手摇离心管的方式重悬,不要用移液枪吹),将细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm, 3min)。

4. 去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重悬细胞 (还是以手摇离心管的方式混匀,不要吹细胞), 放入培养箱消化2分钟。

5. 消化2分钟后,加入5mL含血清的培养基混匀终止消化,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,离心 (1100rpm, 4min)。

6. 去掉上清,加入6mL左右的细胞相应的完全培养基混匀,视细胞量决定是1:2传代还是1:3传代 (由于细胞运输有损伤,首次传代建议比平时养密度稍高)。

7. 显微镜下观察细胞是否有分散成单颗,若有明显很大的细胞团需要重复上述步骤二次消化3~5个细胞的小团则不用干预,待细胞贴壁后再进行消化分散即可。

8. 第二天及时观察细胞贴壁情况,若贴壁细胞量过多细胞堆积,请于贴壁24小时后再次传代分瓶,若密度正常则继续生长,不建议换液,贴壁48小时后换液去除不能贴壁的细胞。

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