1 ChIP-seq
染色质免疫共沉淀 (Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)
研究体内蛋白质与DNA结合的技术。简单原理:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。研究人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。
研究的转录因子为已知的转录因子,且需要抗体拽。
2、ATAC-seq
ATAC-seq:(Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing)是用于研究染色质可及性(通常也理解为染色质的开放性)的方法, 原理是通过转座酶Tn5容易结合在开放染色质的特性,然后对Tn5酶捕获到的DNA序列进行测序。
染色体由核小体为单元组成,而蛋白质缠绕(我记得是1.75圈)在组蛋白上(8聚体)形成核小体,很多核小体,进一步折叠、浓聚,并在其他架构蛋白的辅助下,形成染色体。
反式作用因子和顺式作用元件进行结合时,染色体是需要打开的,即将紧密的结构变的松散,叫开放染色质(open chromatin),欢迎你来结合,而染色质的这种特性,就叫做染色质的可进入性(chromatin accessibility)。
根据这样的思路,利用Tn5转座酶容易结合到open chromatin上特性,对其进行加标签,而后对结合的DNA进行测序即可,这样就可以在全基因组上进行检测open chromatin,这些地方容易被转录因子结合。
3、DAP-seq
DAP-seq:(DNA affinity purification sequencing) 是一种高通量TF结合位点发现方法,用体外表达的TFS来询问基因组DNA
在全基因组水平,检测某个DNA结合蛋白的分布。是ChIP-seq的一种替代方案,在体外重组表达转录因子蛋白,与基因组DNA相互作用,对与重组蛋白结合的DNA测序,分析获得蛋白结合的基因位置,以及特异的DNA基序(motif)。
由于不需要特异抗体、以DNA与蛋白质的固定,比起ChIP-seq降低了实验的技术要求。由于是体外互作实验,在分析时需要引入对照,并且与其他方法联合分析。
重点是不需要抗体,在体外表达转录因子。(这与chip-seq有很大区别)
将一个标记的转录因子添加到DNA文库中,让它随机结合DNA,随后再分离出所有配对DNA-蛋白,这种方法叫做DNA亲和纯化测序(DAP-seq)。DAP-seq作为Chip同样功能的体外实验技术,是研究非模式植物的顺反组的一把利刃