五、流行性出血热(肾综HFRS、汉坦病毒HV)
简称“出血热”，统称“肾综合征出血热”。汉坦病毒、自然疫源性。<u>发热、出血、肾损伤</u>。鼠类自然宿主&传染源。我国发病人数世界90%。
(一)病原
汉坦病毒HV、负链分节段RNA(L、M、S)。负染颗粒表面-独特方格状结构。
(二)病原分离方法
Vero-E6细胞、A549(人肺癌)、2BS(人胚肺二倍体)、RL(大白鼠肺)。
发病5天内，静脉采血→接种长成单层的细胞培养瓶→培养3代→制成抗原片→①免疫荧光试验②中和试验③交叉阻断试验④酶联免疫吸附试验测抗原⑤反向间接血凝测抗原⑥测核酸序列
(三)特征性基因与抗原检测
核酸探针杂交法→外周血白细胞提取的核酸杂交→测病毒RNA。
RT-PCR、标记荧光素的抗体检测特异性抗原。
(四)抗体检测
ELISA-双份血清IgG，4倍↑
六、埃博拉出血热病毒
埃博拉出血热ebHF、仅非洲，扎伊尔北部Ebola小河。
(一)病原
丝状病毒科、单股负链RNA。胞浆内繁殖、芽生释放。
(二)病原分离方法
必须4级实验室。急性期血标本→Vero细胞培养or豚鼠腹腔。
组织培养无细胞病理变化、免疫荧光法看到病毒抗原-胞浆内。
(三)特征性基因
RT-PCR & 杂交法→检测RNA
(四)抗体检测
间接免疫荧光、固相间接酶免疫试验、放射免疫试验、蚀斑减少中和试验、单克隆抗体的EIA法(酶免疫分析)。
七、乙型脑炎病毒(JE、乙类)
流行性乙型脑炎/日本脑炎JE。蚊媒传播，人畜共患、急性传染病 、乙类传染病。
猪-贮存宿主、三带喙库蚊-传播。
(一)病原
黄病毒科黄病毒属(丙肝)、单股正链RNA。5个基因型:根据E蛋白(包膜糖蛋白)编码核苷酸。
不耐热:50℃30 mins、54℃10 mins，但4℃ 数年。
超声波紫外线可灭活，化学因子敏感。
地鼠肾、猪肾、鸡胚原代细胞，BHK-21、Vero、C6/36等传代细胞。感染细胞明显病变。明显的嗜神经特性、凝集红细胞。
(二)病原分离方法
血液、脑脊液、尸检标本、蚊虫。冷链
细胞培养系统or乳鼠培养系统。
<u>脑脊液、尸检脑组织</u>接种BHK、C6/36。
阳性结果判定:CPE/致细胞病变效应、红细胞吸附试验、单克隆抗体免疫荧光。
(三)特征性基因与抗原检测
PCR--PrM区段，确定感染&明确型别→地域特征。
E蛋白/包膜糖蛋白:诱导宿主产生中和抗体&保护性免疫应答、决定毒力、帮助进入细胞、血凝活性。
(四)抗体检测
免疫荧光/ELISA→检测抗体，使用灭活全病毒做抗原。
脑脊液、血液中IgM抗体→早期诊断
补体结合试验→回顾性诊断、流病调查。
血凝抑制试验→临床诊断&流病调查。
八、登革热病毒(C6/36细胞、伊蚊传播、乙类)
Dengue fever，DF。1~4型，伊蚊传播。乙类
流行最广！虫媒病毒病。<u>登革出血热DHF、登革休克综合征DSS.</u>
(一)病原
黄病毒科黄病毒属，正链RNA病毒。
E蛋白-主要包膜蛋白、诱导保护性的中和抗体。
(二)病原分离方法
C6/36细胞-最常用。** 巨蚊**胸腔接种&幼虫脑内接种。
(三)特征性基因与抗原检测
cDNA RNA杂交技术、RT-PCR。
单克隆抗体结合<u>放免法</u>测抗原，检出率43%~47%。
ELISA-抗原鉴别。
单克隆抗体<u>免疫荧光法</u>-国内广泛应用、但特异性差。
免疫胶体金电镜技术-较新、较昂贵。
(四)抗体检测
经典方法:血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验
近年常用:空斑减少中和试验、免疫荧光试验、免疫酶染色法。
IgM意义大-ELISA法、有重要价值。
九、克里米亚-刚果出血热/新疆出血热(蜱传播、接种乳鼠)
<u>CCHF</u>、蜱传播、1944克里米亚发现、新疆出血热
(一)病原
布尼亚病毒科、内罗毕病毒属，负链分节RNA。
蜂-自然宿主、偶尔-库蜱属库蠓。
(二)病原分离方法
接种乳鼠最敏感--脑内、腹腔同时接种
乳鼠脑组织-抗原，血清学交叉试验or免疫印迹试验。
CCHFV-多种细胞(<u>SW-13</u>、空斑试验)繁殖，空斑试验or免疫荧光法确定感染性。
(三)特征性基因与抗原检测
核衣壳蛋白基因设计引物→RT-PCR诊断
反向间接血凝RPHA、ELISA→早期确诊。-敏感性较低。
(四)抗体检测
动物中和试验、补体结合试验、反向间接血凝&血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光、免疫印迹、双向琼脂扩散。两种方法同时阳性最终确认。
