抗原：是指能启动、激发和诱导免疫应答的物质，像细菌、病毒或寄生虫，也可以是自身的组织器官。抗原能被T、B淋巴细胞表面的受体识别、结合并诱导机体产生免疫应答能力，即免疫原性。与免疫应答的产物发生结合的能力称为反应原性。
完整的抗原：同时具有免疫原性和反应原性。
半抗原：只具有反应原性的物质。半抗原与载体连接后可成为完整的抗原，进行抗原抗体反应。
抗原三大特征：免疫原性、反应原性、特异性
免疫原性取决于抗原的异物性、理化特性及抗原进入机体的途径和方式有关。特异性取决于抗原分子所含有的表位。
抗原表位（抗原决定簇）：抗原分子中决定抗原特异性的氨基酸残基组成序列（一级结构）——线性表位，或由不连续的蛋白质三维结构组成——构象表位。是决定抗原特异性的基础。
抗原决定簇大多数位于抗原物质的表面，有些存在抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后暴露出来。一般由5-17个氨基酸残基组成。一般抗原有多个表位，半抗原相当于一个独立的抗原表位。
在WB实验中，经裂解变性后蛋白质成一级结构，故识别线性表位。但有些在非变形条件下结合的是构象表位。
抗体：是免疫系统在抗原的刺激下由B淋巴细胞或记忆B细胞增殖分化成浆细胞产生的，可以与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
抗体三大特性：特异性、多样性、免疫原性
病原微生物进入人体后，B淋巴细胞病原体/抗体表面结构特征，迅速产生众多抗体蛋白，从这些蛋白中筛选出最能够结合抗原的抗体分子，实现免疫功能。
抗体结构：“Y”型结构，两条轻链（L链）~25kD，两条重链（H链）~53-75kD。轻链和重链之间由二硫键连接。同一抗体分子中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。
可变区（V区）：位于H链靠近N端的1/5或1/4处或L链靠近N端1/2处，V区氨基酸的组成和排列随抗体结合抗原的特异性不同而改变。
恒定区（C区）：除去可变区其余均为恒定区，C区氨基酸的组成和排列在同一种属动物的同种亚型中都比较恒定。
2个抗原结合部位（Fab）：“Y”上半部分的“V”部分
一个基部片段（Fc）：是抗体与效应分子或细胞相互作用的部位
##### 抗原与Fab段结合，一抗和二抗结合再Fc段
铰链区：是一条单链，所以赋予抗体可以进行多种旋转。
用木瓜蛋白酶处理后，可形成2个Fab和1个Fc
一抗：与抗原特异性结合，能识别出目标蛋白，但是用肉眼看不出来。
二抗：与一抗恒定区特异性识别，并带有可被检测出的标记（HRP、荧光），可以检测一抗的存在，并能放大信号。以多抗为主。
单克隆抗体（mAb）:由单一B淋巴细胞克隆产生的高度统一、仅识别某一特定抗原表位的抗体。如何获得：由动物免疫后，采取杂交瘤技术来制备。一抗使用目的蛋白免疫。
多克隆抗体（pAb）:由多个B淋巴细胞克隆产生，受多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体。如何获得：由动物免疫后，直接采取血清获得。二抗使用健康动物体内提取的非特异性免疫球蛋白进行免疫。
内参抗体：是在检测样品中高表达，且表达水平相对稳定，一般选择管家基因编码的蛋白。用途：矫正蛋白上样量；判断转膜效率；判断Marker分子量是否正确；判断实验流程是否正确。
内参抗体如何选择：首先确定样本种属（动物/植物），再看细胞定位（全细胞裂解液/和蛋白），最后判断分子量，内参蛋白的分子量和目的蛋白的分子量相差不应太大或太小。
蛋白标签：利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化。
