为实现对小鼠部分脑区的病毒感染，科研汪最近在学习脑立体定向注射技术。这项技术有着摆脱血脑屏障限制，感染位点特异，且病毒用量少的优点，是神经系统病毒感染常用注射方法。同时，由于该技术操作复杂且难度大，对动物损伤较大，感染范围局限，要想实现实验目的，对操作者的技术要求较高。
由于前期，师姐已通过文献阅读和多次练习找到我们课题中需要进行立体定向注射的位点，科研汪的任务就是学习和练习操作。复盘一下第一次操作的心得体会。
1.将麻醉剔毛后的小鼠固定到立体定位仪上。先将小鼠门齿卡在适配器门齿夹上，轻轻压上门齿夹横杆，调整适配器高度和前后，使耳杆可以方便进入小鼠外耳道。托起小鼠头部，将左右两侧耳杆分别插入小鼠耳道，调节左右侧耳杆使动物头部保持在U型开口的中心位置，先锁紧固定一侧耳杆，后旋紧另一侧耳杆，使动物头部固定，不会随操作晃动，同时旋紧门齿夹螺丝。
（检查是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平）。
2.剃去需要手术部位的毛发，然后用手术刀划开小鼠头部皮肤，去除颅骨表面结缔组织，暴露bregma点和lambda点。
3.根据确定的注射脑区的位置参数，以前囟Bregma为0点，移动颅骨钻，用笔标记位置范围，小心地用颅骨钻在注射位点处轻磨颅骨，将颅骨慢慢打薄，当颅骨出现裂缝的时候，用医用注射器的针头小心挑破，防止损伤，如果在此过程中有出血，可以用很小的医药棉球拉成长条形将血吸走（钻孔时一定要控制好钻头，否则很容易在钻通颅骨后钻入脑组织，造成损伤）。
4.测试玻璃电极是否通畅，随后稀释好的病毒。将微量注射泵，微量注射器组装好，并置于钻好的孔上方，微调注射器位置与之前钻孔时位置相同，根据定好的深度将注射针缓慢下降（一般设置微量注射器在10分钟内注射将病毒注射完毕，再保留8-10分钟，一方面让病毒扩散，一方面防止病毒随着针拔出而漏出）。
5.完成注射后缝合头皮，并做好记录。将鼠单独放在一个干净的笼子里，直到醒来，以用于后续实验。
总的来说，想做好这项实验操作耐心，细心必不可少，除此之外更要多多练习。上手操作的第一只鼠，由于吸取病毒稀释液的时候有气泡进到玻璃电极中了，不知道病毒到底有没有打进小鼠脑子里，再加上bregma点选取的时候有些靠后，注射点与目标位置参数有些偏差。等待着实验完成后的最终验证。
