聚合酶链反应(PCR) 技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸存在 的条件下依赖于DNA聚合酶进行DNA片段的酶促合成反应,其特异性取决于引物和模板DNA 结合的特异性。 PCR反应的模板可以是DNA,也可以是RNA,后者的扩增需首先反转录成cDNA 后才能进行正常PCR循环。不同来源的DNA标本均可作为模板,模板中不应含有蛋白酶、核酸酶或TaqDNA聚合酶抑制剂。 引物是待扩增核酸片段两端的已知序列,它决定了PCR扩增产物 的大小。引物的选择是整个PCR扩增反应成功的关键因素。理想的引物应该有效地与靶序列杂交,而不与模板中的其他相关序列杂交。两条引物一般各在0.1~0.5mmol/l,浓度太高会引起错配及非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的概率及造成浪费,太低则可能达不到扩增要求或PCR产量不足。
PCR实验技术的原理是什么?
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