实验目的:获得目的蛋白的粗蛋白,构建反应体系;
表达载体:pLM303;
步骤:
1.挑菌小摇,5 ml,37℃过夜;可保菌;
2.取1 ml加到30 ml LB k+培养基中,37℃,约1.5 h,到OD600约为0.6;
3.取2 ml 作为IPTG加入之前的对照;加入IPTG至终浓度2.5 mM(1 M IPTG母液加75 ul 到30 ml 培养基中),28℃,180 rpm,培养5小时;
4.菌液可以4 ℃保存20天左右;
5.取1 ml超声破碎,取上清,SDS-PAGE检测蛋白是否表达;利用IPTG加入之前的菌液破碎之后的上清作为对照;