1一般常用的固定液有:14%多聚甲醛、10%中性福尔马林、糖原固定液( Carnoy固定液)、植物固定液(FAA),Bouin 液(脂肪、胰腺专用), FAS眼球固定液。
2浸泡固定;最常见的固定方式, 就是直接将样品放入装有固定液的容器中,浸泡(48h)。
3.新鲜取材、新鲜固定。言外之意就是取材要迅速,固定要及时。否则组织在活体动物体内的温度一般情况下高于室温 ,会在离体后因温度差的原因迅速失水,造成不可逆的损伤。
4.广口宽底。容器的瓶口孔径不可以小于组织大小,在固定之前的组织器官是软的,固定之后器官变硬,无法从小瓶口中取出。另外, 底部不平,类似EP管那种尖底很容易限制住组织的活动,导致贴壁,贴壁部位接触不到固定液;会造成局部固定不良,影响后面的实验。
5.组织最佳固定时间是48h,最好不要超过7天即脱水包埋做成蜡块储存,可以很好的保证组织形态和抗原活性, 10年以上。如果当时没有办法处理,尽可能以每三天换一次新固定液的方式置于4度冰箱内储存,最长不超过14天。
6.剖开固定,尽可能减少单位需要固定的组织体积,同样可以达到体积比符合要求的状况。
7.先用生理盐水或其他肠道冲洗专用平衡盐溶液冲洗出肠内食物残渣等内容物,再用固定液将生理盐水置换出来, 最大限度的保证肠腔的管腔结构充盈, 肠内绒毛迅速充分接触到固定液。
8.用纱布包起来组织后用回形针等重物将样品坠到液面以下, 让样品充分浸泡在固定液中。用棉球将瓶口上端堵住也是这个原理,但是棉花的渗透效率没有纱布好。
10.CE、EP管固定是咱们日常生活中接样不可能避免的但是我们要有判断能力,就是这个组织一定要足够小,原则就是可以在底部自由晃动,液体一定要灌满,在快递运输途中,特别容易大头朝下,组织刚好贴在盖上离液体干燥的现象。