与SF通过共价相互作用使尿素酶失活的建议一致,纯化的幽门螺杆菌尿素酶与SF的孵育导致260-320 nm区域紫外线吸收的时间依赖性增加(图1)。 吸收增加的变化幅度取决于SF的浓度。
图1B显示了SF浓度为7.4至740μM的60分钟后在280 nm处观察到的吸收差异。 观察到的吸收变化与SF的异硫氰酸酯(-N = C = S)基团与尿素酶的一个或多个半胱氨酸硫醇基团与在该波长区域吸收更强的二硫代氨基甲酸酯的相互作用相一致。
- N = C = S + HS - R → - NH - C(SR) = S
(图1)
(A)用740μM萝卜硫素处理12、30、76和120分钟的部分纯化的幽门螺杆菌尿素酶(9μg/ mL)的差异光谱随时间变化情况。 对照比色杯中含有同等浓度的萝卜硫素。 (B)当将萝卜硫素(7.4 – 740μM)加入部分纯化的幽门螺杆菌尿素酶(30μg/ mL)中时,在60分钟内在280 nm处的吸收变化情况。
尿素酶和尿素酶-SF复合物之间的差异光谱具有两个吸收最大值(在280 nm和320 nm附近)。 后者与二硫代氨基甲酸酯的形成一致。 差异光谱中的两个等吸收点(在250和330 nm附近)表明,这些光谱变化的反应涉及到相对特定的化学反应(如图1A所示)。
参考资料:
[1] Y. Zhang, Role of glutathione in the accumulation of anticarcinogenic
isothiocyanates and their glutathione conjugates by murine hepatoma cells, Carcinogenesis 21 (2000) 1175–1182.