ALGORITHMS FOR HER2 TESTING
IHC： 检测蛋白质的过度表达
ISH： 检测基因扩增状态
注意1+和2+的区别:
1+:faint/barely perceptible or weak incomplete 薄膜粘连在>10%细胞上
2+： 弱的/温和的 完全的薄膜粘连在>10%或者强壮的完全的在<10%上的粘连
3+注意：
Membrane staining must be intense and uniform and resemble chicken-wire. Ignore incomplete or pale membrane staining in the percentage estimation.
乳腺癌HER2检测指南
组织标本的制备
1．标本类型：(1)手术切除标本；(2)粗针穿刺活检标本；(3)麦默通活检标本。
2．标本固定：所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定(1 h内)。固定时应将标本每隔5～10 mm切开，并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。固定液量与所浸泡组织的比例应足够。固定时间以6—72 h为宜。
3．固定液类型：4％中性(磷酸缓冲)甲醛固定液。
4．组织切片：(1)未染色的切片置于室温不宜超过6周，以防抗原丢失。(2)用于IHC染色者切片厚度以3～5μm为宜，ISH法以4—5μm为宜。(3)完成检测的切片，IHC和亮视野ISH可按常规长期保存，FISH结果应立即照相存档并于一20℃保存，建议至少保存3个月备查。(4)各种检测方法均应有HE染色切片作为对照。
IHC
1．观察程序：应先在低倍镜下观察整张切片，判断染色是否满意及是否存在HER2表达的异质性。正常乳腺上皮不应出现强的细胞膜着色。只评定浸润癌的着色情况，导管原位癌的着色不能作为评定对象。观察细胞膜着色的浸润癌细胞的比例及着色强度，若出现细胞质或细胞核着色提示IHC染色效果不理想或组织处理不佳，建议调整染色条件或更换组织后再行染色。判读时应避开组织边缘及组织处理不佳(如明显挤压)的癌组织。
2．结果判读及注意事项：结果判读标准(按每张切片计；图1，2)：0：无染色或≤10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；1+：>10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；2+：有两种情况，第一种为>10％的浸润癌细胞呈现不完整和／或弱至中等强度的细胞膜染色，第二种为≤10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；3+：>10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。对于2+的病例，应该用ISH做进一步检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送条件更好的中心实验室进行检测。当出现下列情况时HER2状态为无法判读(indeterminate)，包括标本处理不当、严重的组织挤压或边缘效应、检测失败等。应在报告中注明HER2状态无法判读的可能原因，并建议再次获取样本进行HER2检测。在乳腺浸润性微乳头状癌和部分有分泌现象的乳腺癌中，有时浸润癌细胞的细胞膜已呈很深的棕褐色，但却并未呈闭环状完整着色，存在一定程度的不连续性和间断胜，此时至少应视为HER2 2+，并需要行ISH检测进一步明确HER2状态。建议在HER2 IHC检测报告中包括如下内容：患者信息(包括姓名、性别、年龄、门诊／住院号)、送检医师姓名、送检日期、标本信息(包括病理号和蜡块号)、标本部位和类型、抗体信息(克隆号／生产商)、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样本量是否适合评估、判读结果(O、1+、2+、3+)、检测结论(如阳性、不确定、阴性、无法判读)。
IHC染色法
3，3-二氨基联苯胺（这是它的全名）
免疫组织化学方法常用的显色液
底物显色剂：
DAB （3，3-二氨基联苯胺）：显色后阳性反应产物呈棕褐色。
AEC （3，氨基-9- 乙基卡巴唑）：显色后阳性反应产物呈红色或紫红色。
(检测HER2只是用苏木精衬染，不是用HE染色法)苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
In situ hybridisation：原位杂交
