2019年1月17日，星期四，晴
今天又醒来很早，打开手机发现老婆给我发了一个链接宝钢优秀学生特等奖、36篇SCI论文……东大“学神”是怎样炼成的？，内容是关于她本科同学的报道——这位同学在读书期间发了很多SCI文章也获得了各种奖项。我老婆非常佩服，我仔细研读了这个报道，感觉这个家伙确实很牛！希望自己好好努力，也能达到这个成绩。（注意我的希望只是希望而已，呵呵～）
随后认真学习了一下引物设计的知识。
一、Primer5 Primer5设计引物------图文并茂一步步教你 （文末有软件下载链接）
二、primerbank 学会这个方法，5 分钟找到合适的 qPCR 引物
今早PZP同学临时有事。没办法做qPCR，我就趁机抢过来使用。刚好我设计的引物也回来了，只是一直没有时间试验一下自己设计引物的结果。再加上最近我提起的RNA浓度都很高，而且纯度也合格，所以跑qPCR的兴致极高。但是今天的结果还是很不满意，首先3复孔的组间差异很大，这主要是加样不够精准所致。其次是有的基因如M3和SN12都没跑出来。这个原因就复杂很多了，是引物特异性不行呢，还是试剂有问题呢？今天中午特意找了试剂公司的技术员咨询了原因？他们给我的答复是试剂盒肯定是没问题的，因为你那个内参都跑出来了，而且M14也跑出来了，而且溶解曲线都是单峰的。这反过来说明M3和SN12这两个基因的引物还是有问题的。另外SN12是长链非编码基因，这个逆转录试剂盒不适合它，所以跑不出来。这让我想起泌尿外科ZB医生，他做的miRNA，逆转录的操作确实不一样，所以赶紧让销售员帮我拿点试用装过来试一下。
针对引物设计特异性不高，我专门请教了厦门师弟WZG，他是这方面能手。他连基因过表达和敲除的实验，都是自己构建的载体。好厉害！
今天同门YFQ跑过来做养细胞的，他准备在我们这边缺氧工作站做实验。他拿了一个大大的13cm的培养皿，我还是第一次看到。
下午，查看140和510，发现这两细胞的生长状态都很不错，所以决定冻存起来一部分。在操作140的时候，我不小心出现的一个小差错，不知道会不会导致140细胞污染了，好担心！！
与Het细胞的销售商沟通后，他们答应我，年后再给我寄过来一些。
下午的实验完成比较早，一看时间才4点40分左右，舍不得这么早回去，所以就再练习提取组织RNA。（不小心把其中一个研钵摔碎了，碎碎平安！！）过程是无聊的，结果是非常棒的！这是我这两个月来提RNA最值得骄傲的一次了，因为那个微量分光光度仪，居然连一个提示都没有（三角形和感叹号）。这次RNA的纯度是1.98，浓度是1600多！！可不要太开心了。
对了，中午我还和LZ同学联系了，目前细胞状态不错，明天可以去拿回来了。刚好班长还天天跑大学城，就让她帮我带回来了。（这次神龙一定要召唤出来啊！）
通过与不同的试剂商打交道，发现鼎国公司的产品卖比较实在，就比如说买迈新的的产品，致仁公司要加价10%，而鼎国公司就按迈新官网价格给我。以后要学聪明点，根据这两家公司的优势，订购产品！
先展望一下明后天的工作，因为后天要去切病理蜡块了，所以明天一定要把载玻片写好。可还有一千张载玻片明天才会到，这些要赶制出来，加油！！
傍晚已经预约了明早的qPCR，这次我一定要成功！！切记，要进口的枪和进口的枪头！一个孔一个枪头！按照试剂盒技术员告诉我方法，先将cDNA稀释五倍，然后取2ul模板，以保证效果！
附：引物设计软件primer5
链接：http://pan.baidu.com/s/1bo4v4Bl
密码：关注，点赞，转发，私信给我可免费获取。
