题目：
同种异体Vγ9Vδ2 T细胞免疫疗法具有良好的临床安全性，可延长晚期肺癌或肝癌患者的生存期
Allogeneic Vγ9Vδ2 T-cell immunotherapy exhibits promising clinical safety and prolongs the survival of patients with late-stage lung or liver cancer
作者：
尹芝南，暨南大学
期刊：
Xu Y, Xiang Z, Alnaggar M, Kouakanou L, Li J, He J, Yang J, Hu Y, Chen Y, Lin L, Hao J, Li J, Chen J, Li M, Wu Q, Peters C, Zhou Q, Li J, Liang Y, Wang X, Han B, Ma M, Kabelitz D, Xu K, Tu W, Wu Y, Yin Z. Allogeneic Vγ9Vδ2 T-cell immunotherapy exhibits promising clinical safety and prolongs the survival of patients with late-stage lung or liver cancer. Cell Mol Immunol. 2021 Feb.
目的
为了将同种异体Vγ9Vδ2 T细胞应用于过继免疫治疗，需要优化用于在体外获得具有最佳效应功能的足够细胞数量的方法，并且还需要证明临床安全性和有效性。因此，我们开发了一种新配方来改善来自健康供体的外周γδ T细胞的扩增。然后，我们使用人源化小鼠模型验证了扩增的γδ T细胞在体内的治疗效果;此外，扩增的γδ T细胞被过继转移到晚期肝癌和肺癌患者中。
科学障碍
目前至少有两个科学障碍需要克服，才能有效地将同种异体Vγ9Vδ2 T细胞应用于临床肿瘤治疗。
一是需要优化现有的细胞扩增方法，以获得大量具有较强抗肿瘤活性的Vγ9Vδ2 T细胞。这里的一个障碍是外周血中Vγ9Vδ2 T细胞的数量有限，通常占外周血T细胞的2-4%。
第二个科学障碍是同种异体Vγ9Vδ2 T细胞转移的临床安全性需要科学证明。这只能通过癌症患者的临床研究来实现。
材料方法
1.Vγ9Vδ2 T细胞功能分析
用 2CD5 抗体和 CD28抗体刺激 Vγ28Vδ6 T 细胞 5 小时。然后，用表面标志物抗人CD3-APC-H7，抗人TCR Vδ2-PerCP和抗人CD107a-APC抗体染色细胞。染色后，分别使用裂解液和透化液固定和透化细胞。随后，用抗人IFN-γ-PE-Cy7，抗人TNF-α-PE及其相应的同种型对照处理核标志物。
细胞周期、细胞增殖（Ki-67，BioLegend，克隆：Ki-67）、细胞分化（CD45RA，BioLegend，克隆：HI100）、CD27（BioLegend，克隆：O323）、线粒体和共刺激分子。
2.体外细胞毒性测定
2μM CFSE预染几种人癌细胞系。将效应细胞和靶细胞在37°C下以不同的E：T比（1：1，1:5和1:10）共培养6小时。使用流式细胞术和PI染色分析癌细胞的细胞凋亡。
3.使用人源化小鼠体内评估Vγ9Vδ2 T细胞的抗肿瘤活性
结果
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我们发现，扩增的细胞在体外和人源化小鼠模型中都具有显着改善的免疫效应功能，包括增殖、分化和癌细胞杀伤。此外，一项针对132名晚期癌症患者的I期临床试验，共输注414个细胞，明确验证了同种异体Vγ9Vδ2 T细胞的临床安全性。在这132例患者中，接受≥8次细胞输注的肝癌患者和10例肺癌患者生存期大大延长，初步验证了同种异体Vγ5Vδ9 T细胞治疗的有效性。我们的临床研究强调了同种异体Vγ2Vδ9 T细胞免疫疗法的安全性和有效性，这将激发进一步的临床研究，并最终使癌症患者受益。
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新配方促进了Vγ9Vδ2 T细胞的增殖和分化
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3.新配方减少了细胞凋亡，NF细胞表达的共刺激分子水平高于OF细胞
4.NF细胞表现出比OF细胞更强的细胞能量代谢。报道的文献表明糖酵解在活化和效应CD8 T细胞中占主导地位，揭示NF是否改变Vγ9Vδ2 T细胞的细胞代谢是有意义的。
5.NF细胞表达更高水平的效应分子，对癌细胞的体外杀伤能力强于OF细胞。NF大大上调了与活化（NKG2D），效应功能（IFN-γ和TNF-α）和脱颗粒（CD107a）相关的分子的表达。
- 人源化小鼠NF细胞抗肿瘤活性的体内验证。未经治疗和OF细胞处理的小鼠分别存活不到62天和88天。相比之下，对于NF细胞处理的小鼠，一只小鼠存活了98天，另一只存活了118天，其余三只小鼠在第238天处死时仍然活着（两只没有肿瘤，一只在第125天复发肿瘤）。此外，我们进行了实时成像以可视化人源化小鼠中A549癌细胞和γδ T细胞的共定位，结果显示，在输注后48小时，只有NF细胞（红色）与肿瘤细胞（绿色）在视觉上共定位（图）。[4e]，暗示NF细胞的归巢能力更强。
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使用异体Vγ9Vδ2 T细胞扩增的新配方对晚期肝肺癌患者进行免疫治疗。只有8名肝癌和10名肺癌患者接受了≥5次NF细胞输注。（1-2×108每次处理的细胞，纯度>90%）。
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