如何从干血斑中提取高质量的基因组DNA?

操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、1.5ml 离心管。

2. 取出洗涤液 A 和洗涤液 B,按以下操作:

a) 洗涤液 A:7mL 加入 3mL 无水乙醇;14mL 加入 6mL 无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液 B:3mL 加入 7mL 无水乙醇;6mL 加入 14mL 无水乙醇,混匀。

3. 取 1.5ml 灭菌离心管 1 支,加入 200 μL 裂解液和 20μL 消化液,振荡混匀,再加入 3-6 片直径 6mm 干血斑,300rpm 振荡 8-12 分钟,至干血斑滤纸片变白,再 65℃孵育 10 分钟。

4. 取出离心管,室温放置 2 分钟,弃去滤纸片。加入 500μL 无水乙醇,振荡混匀。

5. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内,加 500 μL 洗涤液 A 至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内,加 500 μL 洗涤液 B 至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心 3 分钟,离去残留的洗涤液。

9. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入 20 μL 洗脱液,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 2 分钟,收集 DNA 溶液。提取得到的 DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1、此处推荐的血斑血量约为 50-200μL,血量过少或过多,应适当减少或增加试剂量。

2、析出液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗。

3、裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。

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