凝血块DNA提取操作步骤

产品特点

◎独有裂解液配方,凝血块消解快速,可在30分钟内获得基因组DNA;

◎改性离子膜技术,提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9;

◎DNA提取得率高,可在相当于200μl 全血的凝血块中提取2-5 ug基因组DNA。

产品介绍

BIOG DNA Clotted Blood Isolate Kit是独家研制的专门用于凝血块基因组DNA提取的试剂盒。本试剂盒采用百代独有的裂解液和消化液配方,可快速消解凝血块的纤维网络,释放有核细胞,因而提取的DNA比较充分。BIOG DNA Clotted Blood Isolate Kit采用了最新的离子膜技术,裂解液和洗脱液经过多次优化,提取得到的DNA产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。

操作步骤 请自行准备无水乙醇、异丙醇、灭菌1.5mL离心管

1. 取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液B:18mL加入42mL无水乙醇;36mL加入84mL无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

2. 取1.5ml离心管,放入5x5x5mm大小的凝血块,用枪头反复敲打挤压至1x1x1mm大小,加入200 μL裂解液、40μL消化液、涡旋强烈振荡30秒,65℃温育20分钟至血凝块完全消解。

3. 加入150μL异丙醇(总体积的25%),混合均匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液;

5. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,静置1分钟,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。

8. 按每份样本30μL 取洗脱液(如10份提取样本,即取300μL 洗脱液),放置于灭菌1.5mL离心管,65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 灭菌离心管内,在吸附柱中心加入30 μL 预热洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼

睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

2. 洗涤液在使用前应加入无水乙醇后充分混匀。

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