本次阅读文献是2006年发表在《Nature Cell Biology》上的《GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 is essential forangiosperm fertilization》，通讯作者是日本立教大学理学院生命科学系的Tsuneyoshi Kuroiwa教授，第一作者是Toshiyuki Mori，GEX2也是他发现的。
科学问题：找生殖系特异表达的基因
方法：通过比较第一次有丝分裂之前（小孢子母细胞），分裂后早期（生殖细胞），第二次有丝分裂前（生殖细胞）的基因的表达。结果找到了。RT-PCR该基因特异表达在花粉发育的晚期，被称为GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 ( GCS1)
该蛋白是一个单次跨膜蛋白，N端有个预测和囊泡运输的转运区，C端有一个富含HIS的区域。并且在多个物种中存在同源基因。
免疫印迹法来鉴定GCS1的表达pattern，发现在生殖细胞的表面。
要来T-DNA插入的杂合突变体，进行常规的突变体检测，然后观察表型，发现明显的败育情况，做回交发现是雄方的问题（回补没有），随后进一步确定表型原因，苯胺蓝实验发现花粉管的接收是没有问题的，且种子的发育存在问题，作者认为是在花粉管接收之后的原因。于是乎，他就用了T-DNA插入突变体的kana抗性，突变体做雄方时，后代没有抗性，说明问题在雄方，是雄方没有融合。
为了进一步观察，于是在在突变体力表达了DUO-RFP，在进行DAPI，然后切片，观察，发现精细胞没有卵细胞和中央细胞融合。确认参与精卵融合。
后续还有文章报道拟南芥中的HAP2《Arabidopsis HAP2 (GCS1) is a sperm-specific gene requiredfor pollen tube guidance and fertilization》，是和本次文章同一年发的，可见竞争激烈，除了融合的表型，还报道了参与花粉管导向的表型，似乎近期被证伪了。
近期的结构数据表面HAP2可以形成一个三聚体，并通过形成一个融合环，来介导融合。文章在此《Evolutionary Diversification of the HAP2 Membrane Insertion Motifs to Drive Gamete Fusion Across Eukaryotes》。
评论：领域重大突破，感觉以前人做实验都好麻烦啊，还是现在方便多了。
