非洲猪瘟病毒核酸检测
一、样品制备（实操样品制备）
编号1为阴性质控原液
编号2为阳性质控原液
3-6号为样品由阳性质控原液稀释，取30ul阳性质控原液，加入到装有270ul生理盐水的1.5mlEP管中，涡旋混匀为样品3，再精准吸取30ul阳性质控原液（3样品），加入到装有270ul生理盐水的1.5EP管中，即为样品4，依次类推稀释到样品6。
把制备好的样品转移到传递窗口待用。
二、反应体系配制
1份反应体系由10ulPCR扩增反应液+5ul实时荧光混合液+5ul模板组成
按16份配制，取160ulPCR反应液+80ul实时荧光混合液，涡旋混匀，按15ul/管分别装于PCR反应管中，盖上盖子转移至传递窗待用。
试剂盒和提取流程：
1、取出深孔板，颠倒混匀使磁珠重悬，轻甩板孔使试剂盒磁珠集中到孔板底部，使用前按住深孔板小心撕去封口膜。
2、在深孔板的2、8列加入200ul样本，每个样本孔加入20ul蛋白酶K。
3、将磁棒套插入32道自动核酸提仪磁棒套架卡槽内。
4、选择程序并运行，自动化程序结束后，将6、12列核酸样品取出，待用。
5、在配制好的扩增体系配制液里分别加入阴性对照5ul，样品各5ul，阳性对照5ul，盖好盖子，瞬时离心，转至传递窗待扩增。
6、上机选择程序扩增。
7、检测结果读取分析。
附图
细菌学实操步骤
1、培养基制备
将培养基（50ml），均匀倒入3块一次性培养皿，做好标记。
2、平板划线（3区）
用烧灼后的接种环挑取营养琼脂上的单菌落，接种到营养琼脂、麦康凯平板，做好标记，37℃孵育18-24小时。
先将挑取的菌落均匀涂抹于平板表面边缘一小部分约1/4区域（第1区），烧灼接种环，将环通过1区3-4次，连续划线（为第2区），不用烧灼接种环，按照同方法依次划第3区，平板上每区的细菌数会逐渐减少，直至分离出单个菌落。
3、药敏实验
菌悬液的配置
在生物安全柜操作，准备一只无菌西林瓶，加入1ml左右生理盐水，用接种环无菌挑取营养琼脂上的典型单菌落在瓶壁上研磨充分，使菌落与生理盐水充分混合
选择适宜比浊管进行比浊（0.5和1）
接种平板
用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁内旋转挤压，去除多余水分，用拭子均匀涂抹培养基表面，可多个角度涂抹使其涂抹均匀，最后在琼脂平板边缘涂抹一圈。
贴药敏片与培养
用记号笔在培养皿背面做7个区分布，做好记号1-7
用无菌镊子夹取药敏片平放在琼脂并轻压使其紧贴于琼脂平板
每次夹取药敏片之前都需要灼烧一次镊子
将培养基放于温箱，37℃培养18-24小时，观察结果。
观察结果参照如图
