IPTG诱导表达原理

Lac阻遏物是一种具有4个相同亚基的四级结构蛋白,都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态,Lac阻遏物(即下图中的阻遏蛋白)能与操纵基因O结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,阻止了转录的路径,从而抑制转录启动。而当有诱导剂(这里指IPTG)存在时,诱导剂可与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白构象发生变化,导致阻遏物从操纵基因O上解离下来,RNA聚合酶不再受阻碍,启动子P开始发生转录,启动反应开始发生转录。

在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖——即生理上的诱导剂。而在实验中,通常选用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,IPTG是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。

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