产品特点
◎采用真空浓缩技术,高效富集提取中量和大量尿液样本中的低浓度DNA,尿液DNA提取浓度较普通试剂盒可提升5倍以上,有效解决了提取DNA浓度较低无法进一步分析和对靶基因进行检测的问题;
◎提取DNA纯度高,无抑制剂,提取的DNA可用于各种PCR、荧光定量PCR、测序和分子杂交等。
产品介绍
BIOG中大量尿液DNA提取试剂盒是专门用于提取中量和大量尿液样本中低浓度DNA的富集提取试剂盒。试剂盒配套BIOG便携式真空装置,采用美国实验室进口的高效硅基DNA吸附膜,可高效富集提取较大量尿液样本中的低丰度DNA,使尿液DNA的提取量和提取浓度得以大幅提升,较普通试剂盒的提取浓度大幅提升5倍以上,有效解决了因洗脱液中DNA浓度过低无法进一步分析的问题,如基因克隆、基因检测、微生物核酸检测、测序等。样本提取量可高达2ml。BIOG中大量尿液DNA提取试剂盒提取的DNA终浓度高,有效克服了一般试剂盒样本量大、洗脱液多、DNA提取终浓度依然较低的缺点。试剂盒提取体系经多次优化,提取DNA纯度高,可广泛用于各种PCR、荧光定量PCR、测序和分子杂交等。
操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、异丙醇、1.5mL灭菌洁净离心管、10mL灭菌洁净离心管、10mL无菌注射器。
2. 取出洗涤液,按终浓度70%的比例加入无水乙醇,如3mL加入7mL无水乙醇;15mL加入35mL无水乙醇,充分混匀。
3. 取10mL灭菌洁净离心管,加入2mL尿液样本,再加入2mL 裂解液及60μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴20 分钟。
4. 加入4mL异丙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
5. 将富集吸附柱放在抽滤装置上,再将10mL无菌注射器针筒插入富集吸附柱上端,将上述溶液转入针筒内,静置2 分钟,真空抽滤至富集吸附柱内液体刚刚抽滤完毕(约2-10分钟,注意不要抽滤太干,太干不利于后续步骤开展)。
6. 向针筒内加1mL 洗涤液,静置2分钟,真空抽滤至富集吸附柱内液体刚刚抽滤完毕(约1-5分钟,注意不要抽滤太干,太干不利于后续步骤开展)。
7. 向针筒内加0.5mL 洗涤液,抽滤2 分钟。
8. 按每份样本30μL 取洗脱液(如10份提取样本,即取300μL 洗脱液),放置于灭菌1.5mL离心管,65℃预热。
9. 将富集吸附柱放入收集管内,12,000 rpm 常温离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
10. 取出富集吸附柱,放入新的1.5mL灭菌洁净离心管内,加入30 μL 预热的洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm常温离心2 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
特别说明:1.本试剂盒配套BIOG真空核酸提取装置使用,可提取2mL之内量的尿液DNA,研究者可根据实验需要选择适当量的样本进行提取,所用试剂需按比例调整。2.洗涤液最好现用现配,按需计算用量后配制。加入乙醇后的洗涤液如使用不完,2-8℃密封保存不超过1周。3.在裂解液刚刚抽滤完毕后,应立即加入洗涤液,以防滤膜干燥。4.裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗。5.裂解液、洗涤液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。