前期记录
先确定目标基因
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（1）
然后对目的基因进行背景调查
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（2）磨刀不误砍柴工
设计sgRNA及引物
CRISPR-Cas9（三）--sgRNA设计好之后
对前期文章的补充：
设计sgRNA之后，需要对结果进行判断：
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但为什么0.7044分数的哪一个没有选，我也不知道为什么，总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上来看一下。
image.png
提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在2-3个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：
- LB + 抗生素抗性平板；
- 感受态细胞及相应培养基；
- 无内毒素的Cas9载体质粒；
- BbsI限制性内切酶；
- 质粒小提试剂盒；
- 常规限制性内切酶。
周末愉快！
感谢师兄DZ
