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NGS012 转座酶建库及ATAC-seq转座因子 Transposon 一段DNA顺序可以从原位上单独复制或断裂下来，环化后插入另一位点，并对其后的基因起调控作用，此过程称转座。这段序列称跳跃基因或转座子。转座子是...
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人丑就要多读书呀
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生物信息学的学习笔记
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蛋白质经泛素-蛋白酶体降解研究基本思路（图文详解）泛素和泛素化介绍 泛素 泛素为含76个氨基酸、大小约为8.6 kDa的小蛋白质，在真核生物中普遍存在且高度保守。人类基因组中的四个基因编码泛素：UBB，UBC，UBA52和R...
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@冻春卷 也谢谢你的系列推文(●'◡'●)
CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除
前言： 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后，就要开始验证敲除，除了蛋白表达水平的检测，最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同，由于之前选用的是CRISPR-Ca...
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@冻春卷 从去年年底看你的推文开始学习，现在终于拿到KO细胞系了，非常感谢你这个系列推文对我的帮助！
分享下我个人挑单克隆过程：96孔板内转移到24孔板（大概2天长满），再取24孔板的一半提DNA或者蛋白，更少细胞量没有尝试。测序结果区分多克隆和单克隆杂合子：前者峰形杂乱无规则，后者套峰规则且比例固定，也可以连T载体确定一下。CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除
前言： 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后，就要开始验证敲除，除了蛋白表达水平的检测，最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同，由于之前选用的是CRISPR-Ca...
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明白了 谢谢春卷老师(●'◡'●)
CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除
前言： 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后，就要开始验证敲除，除了蛋白表达水平的检测，最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同，由于之前选用的是CRISPR-Ca...
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春卷老师好，关于单克隆鉴定，有几点想请教：
1.96孔板内的细胞是否不够提DNA？
2.96孔板内细胞扩出来推荐是用24孔板 or 12孔板 or 6孔板？
3.对于测序套峰的是否无法区别是单克隆杂合子还是多个克隆长成的？
4.一直没有太理解为什么连接T载体可以进一步鉴定😂
谢谢春卷老师，感激不尽~~CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除
前言： 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后，就要开始验证敲除，除了蛋白表达水平的检测，最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同，由于之前选用的是CRISPR-Ca...
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@74640e63c49c 我也正在挑单克隆 确实单个细胞长出来的孔就不多... 还要再验证工作量也很大... 共勉 😜
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
大佬说，我只说一次，你自己要记住以最火热的p53为例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--输入p53并选择物种human：tumor protein p53 ...
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@冻春卷 嗯嗯明白了 谢谢春卷老师~ 后面也想做library的screening 希望能多多交流😉
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
大佬说，我只说一次，你自己要记住以最火热的p53为例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--输入p53并选择物种human：tumor protein p53 ...
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@74640e63c49c 您好 不知道你是否这样做了 想请教下把同一基因不同靶点做成pool包病毒后去感染目的细胞，是否可能一个目的细胞内进了多个病毒(包含多个靶点的sgRNA)，然后该基因同时发生多个靶点的NHEJ，这样KO效率是否会高于感染单一病毒？
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
大佬说，我只说一次，你自己要记住以最火热的p53为例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--输入p53并选择物种human：tumor protein p53 ...
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还有很多其他的设计sgRNA的网站，比如CHOPCHOP & CCTop 可以去这些里面看看，还有一些更偏门的软件设计，总之不止zhang lab的这个设计工具的。
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
大佬说，我只说一次，你自己要记住以最火热的p53为例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--输入p53并选择物种human：tumor protein p53 ...
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@冻春卷 好的好的 非常感谢您~ 这个系列是我新手上路最大的救星 我继续把后面的看完可能有些问题就解开了。真的非常感谢这个系列的文章🙇🙏🙏。
CRISPR-Cas9基因编辑2--gRNA设计（下）
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上） 前言： 在上一次文章中，我们已经得到了在线工具设计的sgR...
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春卷老师好，我的目的细胞不是293T，我在确定质粒构建好了后，能够直接转我的目的细胞，就省区转293T这一步？新手上路，非常感谢~
CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
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春卷老师好，最后一part设计检测所需引物，是在CRISPR/cas9载体转染细胞后提取细胞基因组DNA后做PCR的引物吗？以及这PCR的目的是什么呢？扩增成长片段后送去测序吗？
新手上路，不胜感激~~CRISPR-Cas9基因编辑2--gRNA设计（下）
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上） 前言： 在上一次文章中，我们已经得到了在线工具设计的sgR...
